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如何有效降低層析介質(zhì)壽命的衰減

2022-07-06 16:32:51

介質(zhì)的認知

在層析過程之前我們要對層析介質(zhì)的耐壓性,化學(xué)穩(wěn)定性(如化學(xué)耐受性),物理穩(wěn)定性(如壓縮因子),保存條件,分離原理,材質(zhì)做足夠的認識,避免不合適的層析過程影響填料的壽命衰減(如IDA-Ni應(yīng)避免接觸氧化劑還原劑和螯合劑)。如藍曉科技層析介質(zhì)認識,我們需要了解不同的縮寫或者字母代表的是什么:

?Seplife :藍曉科技層析介質(zhì)商標
?FF——Fast Flow :6%高流速瓊脂糖微球,粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?4FF——4Fasr Flow:4%高流速瓊脂糖微球,粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?BB——Big Beads:6%大顆粒高流速瓊脂糖微球,粒徑范圍100-300um,平均粒徑200um
?HP——High Performance ,6%高分辨率,粒徑范圍25-44um,平均粒徑34um
?XL——6%高流速,高載量瓊脂糖微球,粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale ——大規(guī)模,高剛性瓊脂糖微球,粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale HP——高剛性高分辨率瓊脂糖微球,粒徑范圍25-44um,平均粒徑34um
?LS——Low Sub:低配基密度
?HS——High Sub: 高配基密度
?SF——Superfine :超細顆粒,葡聚糖微球,干粉粒徑20-50um
?F——Fine:細顆粒,葡聚糖微球,干粉粒徑20-80um
?M——Medium: 中等粒徑,葡聚糖微球,干粉粒徑50-150um
?C——Coarse: 粗粒徑,葡聚糖微球,干粉粒徑100-300um
?cm/h——線性流速(cm/h)=流速(ml/min)*60/層析柱半徑(cm)平方*圓周率(π)。


蘇州藍曉生物科技有限公司

生物分離介質(zhì)及細胞培養(yǎng)微載體專業(yè)供應(yīng)商

聯(lián)系電話:0512-65160522

樣品的認知

在層析過程要對樣品做足夠的認知,包括樣品的濃度,樣品的組成等做一定的了解,如真核細胞分泌表達的樣品,要了解其上游工藝,培養(yǎng)基組成,培養(yǎng)過程等的一些添加劑是否對填料的性能及壽命衰減會有影響,及樣品的酸堿度,離子強度,濁度等做足夠的了解,必要的時候要進行再次澄清處理及體系置換。

樣品的前處理

在了解完樣品的情況后,結(jié)合層析工藝,對樣品做適當?shù)那疤幚恚梢杂行Ы档徒橘|(zhì)的壽命衰減。

?樣品中的顆粒物質(zhì)在層析前要進行澄清處理,澄清處理的越徹底,對填料壽命衰減影響越小。

?樣品的粘度要盡量小,必要時候要加核酸酶處理,降低大片段核酸含量及粘度。

?樣品的組份應(yīng)滿足層析工藝且對填料的性能沒有影響,必要時可以用藍曉科技的凝膠過濾介質(zhì)Seplife G-25 M介質(zhì)對樣品進行置換體系處理。

層析工藝過程

?優(yōu)化柱床高度使其既滿足工藝指標,又可減少反壓

?優(yōu)化層析緩沖液使其對介質(zhì)壽命衰減的影響最小(比如洗脫強度的合理溫和可以降低配基的脫落和基質(zhì)的老化)。

?優(yōu)化層析過程減少非特異性吸附等也可以有效降低介質(zhì)壽命的衰減過程。

維護保養(yǎng)

不同的介質(zhì)及不同的污染物清洗方法不同,清洗既要保證清洗效果同時要減少對層析介質(zhì)的損傷,還要避免清洗試劑對介質(zhì)的二次污染,選擇合適的清洗方法非常重要。依據(jù)層析介質(zhì)的污染物的種類進行清洗方法,關(guān)注此公眾號,下次分別介紹不同污染物清洗方法的選擇及介質(zhì)維護保養(yǎng)全過程。

清洗是去除再生沒有去除的污染物,那么我們就要了解污染物的來源,污染物與物料及工藝階段,工藝過程聯(lián)系緊密。

1)捕獲階段,物料通常比較復(fù)雜,含有大量的雜質(zhì),色素,內(nèi)素素等,再生往往難以去除干凈,那么待清洗去除的物質(zhì)也很復(fù)雜,清洗過程也很復(fù)雜,可能需要多種模式配合作用,同時清洗的頻率和強度都要高。通常使用1個循環(huán)后就要清洗一次。

2)中度純化階段,物料已經(jīng)去除了大部分雜質(zhì),通過再生殘留在介質(zhì)上的污染物就很少了,清洗過程和頻率比捕獲階段就要低很多。使用5-10個循環(huán)后就需要清洗一次。

3)精純階段,物料已很純凈,只含有微量的雜質(zhì),再生通常就可以達到清洗的目的,此時清洗的頻率和強度就更低。根據(jù)小試確定的清洗需要開始的狀態(tài)進行清洗。

清洗過程注意事項:

?清洗過程要綜合考慮污染物的類型及介質(zhì)的種類,清洗的同時要減少對介質(zhì)的損傷。

?清洗時通常需要多種方法組合使用,清洗過程并非是固定不變的。

?清洗試劑應(yīng)選擇純度高的試劑,避免二次污染。

?清洗之后要立即洗到中性保存。

?清洗狀態(tài)的確定及方法的確定要結(jié)合整個工藝過程。

?清洗之后要對清洗過程進行驗證,保證清洗目的實現(xiàn),可通過測定載量,流速等介質(zhì)的性能指標驗證

層析設(shè)備的影響

層析柱的分布器,清洗死角,密封性,材質(zhì)和介質(zhì)及樣品及層析過程緩沖液的兼容性也會影響層析介質(zhì)的壽命。

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