簡介

rProtein A Seplife Suno/Suni是藍曉科技應對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯瓊脂糖凝膠為基質，通過自主創新技術將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質上。可以特異性地與抗體的Fc區結合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養液等樣品中得到高純度的抗體。

使用設備及試劑

（1）使用設備：蛋白純化系統；

（2）填料：rProtein A Seplife Suni/Suno，裝柱體積1ml；

（3）批次：20211207201/20211208201；

（4）樣品：人免疫球蛋白IgG，上樣量根據實際情況而定，C=2mg/ml；

（5）流動相A1：20mM PBS+0.15M NaCl，pH7.4；

流動相B：0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH3.0；

實驗過程

DBC測試(不同駐留時間)

使用 AKTA pure層析系統編程進行實驗，設定檢測波長為280nm，deltaCp為0.3MPa，將層析柱接入系統，設定流速為1.0ml/min，用流動相B淋洗10cv，用流動相A1平衡15cv；上樣流速分別設置為0.33ml/min，0.25ml/min，0.2ml/min，0.16ml/min（駐留時間分別對應3min，4min，5min，6min），上樣至280nm處吸收值為90 mAu；設定梯度洗脫流動相100%B，流速1.0ml/min，洗脫至基線平，收集洗脫液；最后，使用流動相A1再生10ml，流速1.0ml/min。

評價結果——不同駐留時間下載量及耐堿性

對藍曉兩款填料分別測試了不同駐留時間下的動態載量，結果如下：

表1 藍曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時間下動態載量測試結果

圖1 藍曉rProtein A Seplife Suni不同駐留時間下動態載量測試結果

圖2 藍曉rProtein A Seplife Suno不同駐留時間下動態載量測試結果

圖3 藍曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時間下動態載量測試結果

（1）同期動態載量用液相ProAqa Excel抗體親和分析色譜柱測定

（2）一般要求動態載量至少還有初始的70%以上

實驗結果

1.由上述結果可以看出，在不同保留時間下，藍曉兩款rProtein A填料的DBC（動態結合能力）數值都隨著駐留時間增加而增加，其中，5min的駐留時間與6min差異不大。

2.從上述結果來看，本次試驗中藍曉r-Protein A Seplife Suni在經過100次0.5M NaOH循環后，動態載量還保持在初始的70%以上，耐堿性明顯高于外樣。