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?疏水層析介質

2021-08-23 18:31:24

疏水層析

是根據不同的蛋白與疏水表面產生的相互作用的差異,進行蛋白分離的一種方法。一般而言,離子強度(鹽濃度)越高,物質所形成的疏水鍵越強。

常用的疏水填料有兩種類型:Butyl, Phenyl分別為在seplife 6FF基球上通過一個短接頭,共價鍵合丁基,苯基的層析填料。結構見下圖:

疏水介質特點

◆高鹽濃度的樣品不必做預處理就可以直接上樣

◆溶解在7M鹽酸胍中的蛋白質包涵體可以直接上樣,一次層析分離就可以實現除去鹽酸胍、蛋白復性和分離三個目的,而且復

◆性效果常常好于其他方法

疏水層析基本操作

1、層析柱的選擇

柱床高度通常為5-15cm,規模放大時,可保持柱高不變,增加柱子的直徑。

2、緩沖條件的選擇

3、緩沖液的選擇

◆隨著pH的升高,疏水作用相應下降

◆由于pH升高時,被中和的帶點基團增加,從而導致蛋白質的親水性增加

◆在中性pH條件下與疏水相互作用介質不結合的蛋白質,在酸性pH條件下則能夠結合

4、蛋白質的洗脫

◆低濃度的水溶性乙醇、去污劑和具有鹽溶作用的鹽破壞水的結構、降低表面張力,從而削弱疏水相互作用。

◆乙醇或去污劑的非極性區與結合的蛋白質競爭疏水性配基,從而將蛋白質替代下來

5、柱子的再生、清潔和儲存

◆輕度污染時,蒸餾水洗滌

◆污染物緊密結合時,6 mol/L尿素或6 mol/L鹽酸胍洗滌+起始緩沖液或貯存緩沖液洗滌

◆NaOH可用于溶解變性和沉淀的蛋白質及脂類

◆未使用的介質儲存在封閉的容器中,在4-25℃的條件下保存

◆用過的介質應貯存在含有適當抑菌劑的溶液中,在4 ~ 8℃的條件下保存,不得冷凍

產品技術參數

壓力曲線

色譜柱:XK16*20

流動相:0.1mol/L Nacl

產品訂購信息



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